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在ligation步驟這個產品中，有1篇Facebook貼文，粉絲數超過3萬的網紅辣媽英文天后 林俐 Carol，也在其Facebook貼文中提到， 繼鄧學長貢獻了「俐媽英文教室醫學檢驗篇」之後，姜學長也做了補充🙏🏼 以前都是我一個人努力出英文大餐，現在有了各領域的徒子徒孫一起共襄盛舉，俐媽不孤單，大餐也更精彩了！ ————————————————— 🔗 俐媽英文教室—生物技術篇： 🧬 Cloning 克隆操作實驗相關: 1. Vector 載體...

ligation步驟 在 辣媽英文天后 林俐 Carol Facebook 的最佳解答

辣媽英文天后 林俐 Carol By 辣媽英文天后 林俐 Carol

2019-09-03 23:40:32 有 84 人按讚
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繼鄧學長貢獻了「俐媽英文教室醫學檢驗篇」之後，姜學長也做了補充🙏🏼
以前都是我一個人努力出英文大餐，現在有了各領域的徒子徒孫一起共襄盛舉，俐媽不孤單，大餐也更精彩了！
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🔗 俐媽英文教室—生物技術篇：
🧬 Cloning 克隆操作實驗相關:
1. Vector 載體；媒介；另有向量的意思
2. Plasmid 質體
3. Restriction Enzyme 限制酶
4. Ligation 連接 (常用於描述DNA片段黏合到質體上的手法)
5. Screen 篩選 (Blue and white Screen: 藍白篩選)
6. Gel electrophoresis 膠體電泳(分離不同DNA/RNA/蛋白質分子大小之技術)
7. Transcription 轉錄 (遺傳資訊由DNA複製到RNA的過程)
8. Translation 轉譯 (遺傳資訊由RNA合成多肽/蛋白質的過程)
9. Transformation 轉型作用 (細胞攝取外源遺傳物質之過程, 多用於細菌、植物細胞)
10. Transfection 轉染作用 (將外源基因/質體以非病毒方法植入細胞的過程, 較用於動物細胞)
11. Transduction 轉導作用 (以病毒相關方法將外源遺傳物質植入細胞的過程)
12. Electroporation 電穿孔技術
13. Resistance 抗性 (antibiotic resistance 抗藥性)
14. Cell culture 細胞培養
15. Incubation 培養 (原意為incubate孵化)
16. Expression 表現 (Gene expression 基因表現；overexpression 過量表現)
17. Gene knock-out 基因剔除
18. Extract (V./N.) 抽取，萃取/抽出物 (DNA/RNA/protein/其他; 名詞Extraction指的是抽出的動作)
—————————————————
🧪 PCR = polymerase chain reaction 聚合酶鏈鎖反應
步驟下分為：
1. Denaturation 變性→ Denature (vt.) 改變…特性
2. Annealing 黏合
3. Elongation 延長→ Elongate (vt./vi.) 延長
—————————————————
✏️ 俐媽英文教室歡迎大家踴躍投稿！
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#俐媽英文教室 #俐媽英文教室醫學檢驗篇 #俐媽英文教室生物科技篇 #俐媽英文教室生物技術篇 #cloning

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辣媽英文天后 林俐 Carol

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社群媒體上有些相關的討論：

ligation步驟 在 [求救] Ligation一直接不出來... - 看板Biotech 的必吃


作者flyhuman (睡魔海 )
看板Biotech
標題[求救] Ligation一直接不出來...
時間Fri May 6 12:29:32 2011

我的insert大小是1050bp vector大小是9193bp
insert已經接到TA vector上 定序也確定序列都對
現在是設計帶有EcoRI跟XbaI restriction site的primer
forward:gctctagagc-atg.......
reverse:cggaattccg-tta.......
然後經過PCR放大insert之後 做一次DNA elution
再來將insert跟vector作RE,37度C,40min
(之所以會切這麼短時間,因為老闆說放太久EcoRI會亂切...)
然後65度C inactivation,15min
之後拿去run gel
作gel elution
測完濃度之後準備作ligation
insert跟vector濃度大都在50ng/ul
我的vector input 75ng
我已經試過molar ratio vector:insert=1:3,1:5,1:10
然後T4 DNA ligase 1ul,2 X buffer 5ul
總體積10ul, ligation overnight
隔天做transformation
competent cell是用益生的DH10B 也用過JM109
之前有做過轉空vector進去有成功
transform的過程:
competent cell半融就將10ul的ligation product加進去
放在冰上30min
接著做heat shock,42度C,90s
冰上3分鐘
接著加700ul的LB buffer(無 Ampicillim),37度C,1hr
7000rpm離心2min
抽掉上清液留下pellet,再加75ulLB buffer(無 Ampicillin) resuspension
最後塗盤(100ug/ml Ampicillin)
16hr之後收盤
都沒有長...
請問我的實驗的問題出在哪裡>"<
請高手出手相救 感激不盡
※ 編輯: flyhuman 來自: 140.116.253.121 (05/06 12:31)
推 HEK293:先positive control確定transform沒問題，然後再確認 05/06 12:42
→ HEK293:ligation沒問題(PC)，然後其實切兩個小時EcoRI不會怎樣 05/06 12:43
→ HEK293:ligation體積可以放大到20uL，感覺不是步驟的問題 05/06 12:45
→ HEK293:看看材料方面有沒有狀況吧。ligase buffer壞了之類的(猜) 05/06 12:45
→ gryou:ligation 溫度？ 05/06 13:11
推 shenhsu:如果一直接不起來 我建議你把PCR產物再接一次到TA上 這樣 05/06 13:12
→ shenhsu:至少能確定digest沒問題 我實在不怎麼信任PCR產物直接切 05/06 13:13
→ shenhsu:heat shock 90s會不會太久?! 我看到建議的都低於60s耶... 05/06 13:15
→ jk15:heat shock建議不要超過45S... ligation試試看4度O/N 05/06 14:56
推 leoblack:我家lab就是90s效果比45s好~ 05/06 15:18
推 dodomilk:#1Dk6LayG 參考一下 05/06 15:20
→ flyhuman:抱歉>"< ligation是4度C overnight 05/06 15:56
推 leoblack:我以為ligation都是12~16度C o/n的說 05/06 17:09
推 inchew:vector兩切位如果緊鄰或太近，要分開切不要一起切；要確定 05/06 17:20
→ inchew:primer設計的切位兩側至少要多幾個bp，RE才比較切得成功。 05/06 17:23
→ inchew:我cloning通常失敗是敗在RE cleavage這一步，後續反而還好 05/06 17:24
推 icome:insert切40min也太短了吧 至少兩小時 若有加BSA不至於亂切 05/06 19:59
→ icome:我之前還切過一個晚上的 結果沒事 05/06 20:00
推 yaliu:請問轉形效率好嗎？還有也可以用PCR來確認ligation步驟喔 05/06 20:45
→ yaliu:不過ligation產物不好PCR就是了 05/06 20:45
→ yaliu:還有PCR產物你這樣切40分鐘～很危險..有很大的機率沒切乾淨 05/06 20:46
→ yaliu:如果是我我會切2小時～當然酵素量要夠 05/06 20:47
推 musicman:EcoRI切個1.5hr以上吧 不會亂切啦, 大概load 2ug下去切 05/06 23:06
推 Realthugz:偷切一管長時間的看看 先不要讓老闆知道 05/06 23:15
推 qumai:EcoRI應該還好啦~ 我放過夜也沒事@@ 05/07 14:28
→ qumai:Ligase會有問題嗎 要不要換一下 05/07 14:29
推 ennnnno:看看Ligase有沒有問題~我之前一直做不出來就是ligase壞掉 05/09 20:20
推 ararthur:有個問題 你拿多少DNA去做gel extract? 測濃度50ng/ul有 05/12 14:49
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5、具斷電後再來電自動執行未完之步驟 6、可事先設定或程式執行中可隨時暫停，並維持該步驟之溫度不變 7、同一box之間程式可作15次linking ... LIGATION：16℃ for 1 2.

#75. Quick Ligation Kit - ABclonal

Quick Ligation Kit 包含高效的连接酶和连接反应缓冲液。快速. 连接试剂盒在室温(25°C) 反应5 min ... 1X Quick Ligation Reaction Buffer 组成 ... 快速连接操作步骤.

#76. 基因合成基本觀念

重複此四個步驟直到形成一條DNA鏈，但因限制於化學反應的效率，能合成的 ... 接合反應(ligation)與PCA結合，經由PCA反應組裝好的基因片段，再經接合 ...

#77. 壹、 前言 - 中國文化大學

(c)、保存在-20°C 下備用，或是直接進行ligation 步驟。 D、5′ RACE Adapter Ligation. (a)、將下列組成物加入微離心管(RNase-free)中:.

#78. 20150402 - 捷昇生物科技有限公司

15 分鐘即可完成blunt-end ligation. Quick Stick Ligase. 50 rxns. 100 rxns. BIO-27027 ... The ligated DNA is now ready to be used ... 經過驗證的實驗步驟.

#79. VAHTS® Universal DNA Library Prep Kit for Illumina V3

响。因此，如在Adapter Ligation之后进行长度分选，Adapter Ligation产物纯化步骤(08/标准. 方案/步骤二/6.使用VAHTS DNA Clean Beads对反应产物进行纯化)不可省略，将 ...

#80. 醫病共享決策輔助工具-評估表/體重小於6公斤嬰兒的開放性動脈 ...

(surgical ligation)及2.心導管經皮閉合(percutaneous ... 請透過以下四個步驟來幫助您做決定 ... 步驟三、對於上面提供的資訊，您是否已經了解呢？

#81. Native Chemical Ligation (NCL) | 化学空间Chem-Station

Kent等人，通过NCL法合成了、HIV-1蛋白酶Covalent Diverが[2]。它是当时用化学方法合成的最大的肽（2009年）。 实验步骤. 实验技巧. 参考 ...

#82. 以選殖16S rDNA基因片段的方式探討發情前後圈養雌性大貓熊 ...

進行1 分鐘，以上(2)~(4) 步驟重複40 個循環(5) 72℃進. 行5 分鐘，最後所得產物大小分別約183 及490 bp。 ... 取PCR 產物、pGEM-T vector、Rapid ligation buffer 及.

#83. A Clonging及藍白篩試驗步驟@ 晴天的心蔚藍的天就是想念

1. 質體載入： 1) 將TA cloning vector 及PCR DNA 離心。 2) 使用前先將ligation buffer 震盪過。 處理組對照組Ligation buffer A 1 ul 1 ul Ligation buffer B 1 ul 1 ...

#84. (PDF) [Application of multiplex ligation-dependent probe ...

PDF | To explore the value of multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) for rapid detection of aneuploidies and ... 具体操作步骤见参.

#85. 2012 IGEM 國際生物合成競賽實驗手冊

由轉型步驟完成之ependorf 中，取適當菌液加入LB agar plate 中，使用冷卻之玻璃棒均 ... **Ligation 的buffer (T4 DNA ligase buffer 和1mM ATP)不可用手握回溶!

#86. 一种利用t4噬菌体dna拓扑异构酶i连接dna片段的方法 - Google ...

本发明公开了一种利用T4噬菌体DNA拓扑异构酶I连接DNA片段的方法，步骤一， ... 2015 QuickStep-Cloning: a sequence-independent, ligation-free method for rapid ...

#87. 基于PCR的染色体步移技术研究进展

综述了近年来以PCR为基础的染色体步移技术,比较了这些方法的原理及操作步骤, ... These methods can be classified into two sorts: dependent-ligation PCR and ...

#88. Recombinant T4 DNA Ligase - Novoprotein近岸蛋白

快速连接操作步骤：1）取50ng载体和3倍摩尔量的插入片段，用双蒸水调整总体积为10μl。 2）加入10μl 2×Quick Ligation Buffer，混匀。 3）加入0.5～1μl T4 DNA连接酶， ...

#89. 以實驗室之PBS-XCMTA質體進行TA cloning

Ligation /Transformation. 在PCR tube裡，混合下列材料. Water 4-6μl (視下列材料的體積，總之讓總體積變10μl); T-vector 1μl. PCR product(需純化過，視濃度) 1-3μl.

#90. [求救] Ligation 一直無法成功- 看板Biotech | PTT職涯區

Ligation reaction；先設定vector DNA為100 ng，依據molar ratio insert ... 次，做了快三個月了，均無法長出任何colony，請教大家這步驟是否有我未注意到的地方呢？

#91. MLPA – 多重連接探針擴增技術- Taiwan - 台灣艾捷隆

Multiplex Ligation dependent Probe Amplification (MLPA) は、特定の遺伝子疾患に関連するゲノム上のコピー数異常を検出するための多重連鎖反応によるPCR法です。

#92. Enzo Life Sciences AMPINEXT DNA 文庫制備試劑盒

非常方便- 該試劑盒包含 DNA 文庫制備每個步驟所需的所有組件。 ... (3'-5' exo - )、2X Ligation Buffer、T4 DNA Ligase、接頭、2X HiFi PCR Master ...

#93. 【8.3.1】RNA的体外环化

一般来说，由于与环化步骤相关的负熵（negative entropy），从线性前体 ... 的连接方案(ligation protocol)，连接接头(ligation junction)可以位于 ...

#94. 生物化學-DNA損傷與修復 - 高點醫護網

... 鹼基切除修復(Base excision-repair)過程步驟： 用DNA 糖基化酶(glycosylase)把單一個錯誤 ... 核苷酸(nucleotide excision-repai)切除修復過程步驟：先用核酸外切 ...

#95. How to achieve fast and efficient ligation. - YouTube

How to achieve fast and efficient ligation. ... ligation as part of a cloning workflow using the Thermo Scientific Rapid DNA Ligation Kit .

#96. 呼吸系統常見手術分類編碼實務與病歷書寫注意事項

完全地關閉管狀身體部位的孔口或管腔(如:Ligation of thoracic duct for chylothorax)。 ... 為處置的步驟，術式仍是bypass，非dilation ...