今早的工作是將早期胚胎樣本冷藏至膠模中，以待下午冷凍切片，染色檢驗。
#為了做research你可以去到幾凍
#嫌北歐不夠凍
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因為實驗室的學長姐之前只做過骨頭的冷凍切片,而且只H&E染色
其他組織是做石蠟切片(做IHC)
但是我是要做小鼠皮膚組織的冷凍切片,要做IHC跟IF
目前我看實驗室的protocol有幾個地方覺得怪怪的
1.冷凍切片組織完全沒有固定這個步驟
切完片就-20度C保存,染色前PBS wash
2. IHC跟IF的 blocking 用 奶粉泡
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我參考santa cruz 跟 IHC world 的protocol
santa cruz建議:
切片後染色前用冰的acetone 固定10 mins,
blocking用 10% normal serum/PBS
IHC world建議:
切完片的瞬間,馬上把slide放到95% EtOH固定
我要染的那幾個蛋白(PCNA,mmp-1)不需要blocking
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另外,目前試做發現用PBS wash,組織很多都漂起來,問其他做骨切片的也是這樣
造成好幾片切片都不能用,有沒有什麼好方法?
可以請有經驗的人給我一點意見嗎? 非常困擾
謝謝大家~
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